天地人和 | yyds！全新Strep-tag Ⅱ標簽親和介質，你值得一試~

上一期主要介紹了天地人和第二代產品 Streptactin Beads 4FF，二代產品的高特異性、高純度、低濃度條件下的高親和力等特點也延續到三代產品STarm Streptactin Beads 4FF中。三代產品選擇Streptactin的突變體作為配體蛋白，在純化中具有更突出的優勢。

二代產品在洗脫后需要用HABA再生去除D-脫硫生物素，三代產品D-生物素洗脫后只需用PBS就能進行再生清洗。

圖1.使用PBS清洗介質后再純化效果電泳圖

考慮到脫硫生物素的成本和貨期，很多客戶再使用二代產品時，任然會選擇D-生物素洗脫。同時使用D-生物素對二代和三代產品進行洗脫時，填料的重復使用效果就會有明顯的不同，我們進行了一個對比實驗，且每次純化后使用0.1M NaOH對填料進行徹底的清洗。

圖2.Streptactin Beads 4FF 使用0.1M NaOH再生后純化電泳圖

圖3. STarm Streptactin Beads 4FF 使用0.1M NaOH再生后純化電泳圖

圖4. STarm Streptactin Beads 4FF循環載量變化圖

結論：從圖2和圖3的對比來看，哪怕使用氫氧化鈉對二代介質再生，其再生效果都比較差，但我們新的三代產品，再生之后可重復使用的效果就保持的很好，而且經過再生循環檢測，在位清洗35次后，還能保證80%以上的介質載量。

填料的試劑耐受主要分兩個部分，一是配體耐受的試劑濃度，二是配體在結合蛋白時的耐受試劑濃度。

配體耐受的試劑濃度可以在在位清洗步驟作為參考，當填料純化后有雜質堆積時，可以用變性劑、高鹽、強堿等對填料進行在位清洗。上面已經介紹了使用0.1M NaOH清洗的循環數據，三代產品的配體蛋白也能耐受8M尿素、6M鹽酸胍和2M 氯化鈉。清洗前后載量保持不變，不會導致配體脫落或者失活。

不同來源的蛋白在純化前所在溶液中的試劑也會有不同，下表列出了一部分不會影響標簽和配體結合效果的試劑濃度。

表1. STarm Streptactin Beads 4FF結合蛋白時耐受的試劑濃度

最后我們對二代和三代產品基本性能做了一個對比，讓大家更直觀的看到三代產品的提升。

表2. 二代產品和三代產品的性能差異

圖5.Strep-tag Ⅱ和Twin Strep -tag Ⅱ結合Streptaction示意圖

Twin Strep-Tag Ⅱ與 Strep-Tag Ⅱ相比提升了目標蛋白與Streptactin的鏈接強度，且與二代、三代產品都有較好的結合效果。

同時我們也能提供Twin Strep-tag II的大腸桿菌表達載體pSmart VI載體，該載體是在 pET-28a 載體的基礎上改造而來預留了BamH I和Xho I的多克隆酶切位點，方便基因片段的插入，建議克隆方式為無縫克?。ㄟ@種方式不會額外增加氨基酸）。標簽后插入了SUMO蛋白的核酸序列，促進蛋白的可溶性表達。同時還添加了RFP標簽的核酸序列，可以應用于蛋白表達和純化的鑒定，或者將該載體直接作為蛋白表達的陽性對照使用。

圖6.pSmart Ⅵ 質粒圖譜